Come preparare la soluzione tampone Tris per uso medico o di laboratorio

Le soluzioni tampone sono liquidi a base d'acqua che includono sia un acido debole che la sua base coniugata. A causa della loro chimica, le soluzioni tampone possono mantenere il pH (acidità) a un livello quasi costante anche quando si verificano cambiamenti chimici. I sistemi tampone si presentano in natura, ma sono anche estremamente utili in chimica.

Utilizza per soluzioni tampone

Nei sistemi organici, le soluzioni tampone naturali mantengono il pH a un livello costante, rendendo possibile che si verifichino reazioni biochimiche senza danneggiare l'organismo. Quando i biologi studiano i processi biologici, devono mantenere lo stesso pH costante; per fare ciò hanno usato soluzioni tampone preparate. Le soluzioni tampone furono descritte per la prima volta nel 1966; molti degli stessi buffer vengono utilizzati oggi.  

Per essere utili, i buffer biologici devono soddisfare diversi criteri. In particolare, dovrebbero essere solubili in acqua ma non solubili in solventi organici. Non dovrebbero essere in grado di passare attraverso le membrane cellulari. Inoltre, devono essere atossici, inerti e stabili durante tutti gli esperimenti per i quali vengono utilizzati.

Le soluzioni tampone si trovano naturalmente nel plasma sanguigno, motivo per cui il sangue mantiene un pH costante tra 7,35 e 7,45. Le soluzioni tampone vengono utilizzate anche in:

• processi di fermentazione
• tessuti morenti
• analisi chimica
• calibrazione dei pHmetri
• Estrazione del DNA

Che cos'è la soluzione tampone Tris?

Tris è l'abbreviazione di tris (idrossimetil) aminometano, un composto chimico che viene spesso utilizzato in soluzione salina perché è isotonico e non tossico. Poiché ha un Tris ha un pKa di 8,1 e un livello di pH tra 7 e 9, le soluzioni tampone Tris sono anche comunemente utilizzate in una serie di analisi e procedure chimiche tra cui l'estrazione del DNA. È importante sapere che il pH nella soluzione tampone tris cambia con la temperatura della soluzione.

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Come preparare il buffer Tris

È facile trovare una soluzione tampone tris disponibile in commercio, ma è possibile realizzarla da soli con l'apparecchiatura appropriata.

materiale:

Calcola la quantità di ciascun articolo di cui hai bisogno in base alla concentrazione molare della soluzione desiderata e alla quantità di tampone di cui hai bisogno.

• tris (idrossimetil) aminometano 
• acqua deionizzata distillata
• HCl

Procedura:

1. Inizia determinando quale concentrazione (molarità) e volume del tampone Tris vuoi fare. Ad esempio, la soluzione tampone Tris utilizzata per la soluzione salina varia da 10 a 100 mM. Dopo aver deciso cosa stai facendo, calcola il numero di moli di Tris richieste moltiplicando la concentrazione molare del buffer per il volume del buffer che viene creato. (moli di Tris = mol / L x L)
2. Quindi, determinare quanti grammi di Tris sono moltiplicando il numero di moli per il peso molecolare di Tris (121,14 g / mol).  grammi di Tris = (moli) x (121,14 g / mol)
3. Sciogli il Tris nell'acqua deionizzata distillata, da 1/3 a 1/2 del volume finale desiderato.
4. Miscelare HCl (ad es. HCl 1M) fino a quando il pHmetro non fornisce il pH desiderato per la soluzione tampone Tris.
5. Diluire il tampone con acqua per raggiungere il volume finale desiderato di soluzione.

Una volta che la soluzione è stata preparata, può essere conservata per mesi in un luogo sterile a temperatura ambiente. La lunga durata della soluzione tampone Tris è possibile perché la soluzione non contiene proteine.